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关于SVEA 瑞典色谱柱冲洗的情况了解
点击次数:42 发布时间:2019-12-26
 关于SVEA 瑞典色谱柱冲洗的情况了解
用什么冲
什么叫冲洗色谱柱
通常,色谱柱冲洗就是把色谱柱上的脏东西和对色谱柱有损坏的东西冲出来,并且保存在合适的溶剂中;还有另一种情况,也可以算作冲洗的范畴,就是梯度方法间重新平衡色谱柱的过程。
常用的溶剂
针对于反相色谱柱,通常是用到纯的水和有机溶剂,水主要是作为冲洗掉色谱柱中的盐和其他添加剂,而有机溶剂则是用来冲洗掉一些在色谱柱上有较强保留的污染物,除了在分析中常用到的甲醇和乙腈之外,还有一些对污染物去除能力更强的有机溶剂也可以使用,比如异丙醇。
 
冲多久
到底要冲多久,这个是经常困扰大家的问题,20分钟,30分钟,还是一个小时?
冲洗的计算原理
其实,冲洗色谱柱并不是一个时间概念,而是一个体积的问题:通常要完全置换色谱柱中的流动相,需要至少十倍柱体积,也就是说,要有至少十倍于色谱柱体积的溶剂流过色谱柱才能把里面原有的溶剂彻底置换。
体积的计算
色谱柱的柱体积就是色谱柱的圆柱型体积乘以色谱柱柱填料的孔隙率,所以算下来,一根常用的4.6×150mm的色谱柱柱体积大约是1.5mL,如果是10倍柱体积的量,就是15mL,按照常用的1mL/min的流速,就是15min的时间。
梯度重新平衡的冲洗时间
不过,这仅仅是置换所有溶剂的时间,其实仅仅是适合于短期冲洗色谱柱,比如梯度方法间的平衡时间,但是这还要受到仪器延迟体积的影响,已经流动相是否容易重新达到化学平衡的考虑,通常仪器的延迟体积越大,这个时间要越长,如果所使用的流动相不容易达到化学平衡,还要加长时间,比如使用使用某些缓冲盐的情况。当然也后很多情况下,梯度方法间的平衡时间是不需要这么长的。
清洁色谱柱的冲洗时间
如果需要彻底冲洗色谱柱,还需要更长的时间,通常建议是20倍的柱体积,也就是说,对于4.6×150mm的色谱柱,要冲30分钟才能保证冲洗完全。其他规格的色谱柱可以根据色谱柱的规格和流速进行简单的计算。
 
怎么冲
色谱柱的冲洗,无非两个情况:正常情况下的冲洗和非正常情况下的冲洗
正常情况下色谱柱的冲洗步骤:
使用不含添加剂流动相后的冲洗
正常情况下,仅仅是对色谱柱进行流动相替换和净化,对于一般的方法,只需在方法结束后使用高比例的有机相比如甲醇或者乙腈冲洗色谱柱大约20倍柱体积即可。
使用含盐或添加剂后的冲洗
如果是使用的到的方法的流动相中含有缓冲盐或者其他添加剂的时候,先要使用和方法流动相起始比例相同的纯水相替代缓冲盐一相,冲洗20倍柱体积之后,再换上高比例有机相冲洗20倍柱体积。
 
冲洗后的保存
对于色谱柱的保存,一般是存放在纯的有机相中,短期存放,甲醇乙腈均可,长期存放,建议储存在甲醇中。

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